Métodos de detección de micotoxinas.

Por lo general, las micotoxinas resultan difíciles de eliminar, por lo que debemos prevenir su aparición. Debido a su ubicuidad y los peligros que presentan para la salud animal y pública de las micotoxinas, resulta esencial el establecimiento de límites de tolerancia en los alimentos. En el caso de las aflatoxinas, la legislación en la UE permite un máximo de 0,050 ppbde AFM1 en leche para la población en general y de 0,025ppb en el caso de niños lactantes. Para los EEUU y los países de MERCOSUR (Argentina, Brasil, Paraguay y Uruguay) este límite es de 0,50ppb.

Existe una gran variedad de métodos para la detección de las micotoxinas en los alimentos, entre los que destacan:

Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas (ELISA)

Es una técnica simple basada en anticuerpos policlonales no específicos para la micotoxina  que se desea analizar. Es ampliamente utilizada, pero su especificidad es baja debido a la detección de sustancias que producen interferencias con los anticuerpos, dando lugar a falsos positivos, sobre todo en piensos. El riesgo de falsos positivos es menor en sustratos de materias primas.

Dispositivos de Flujo Lateral (FLD)

Son dispositivos basados en técnicasinmunocromatográficas, como inmuno-tiras o inmuno-filtración, con anticuerpos inmovilizados en su superficie. Son senzillas y rápidas pero presentan reactividad cruzada y falsos positivos.

Cromatografía de capa fina (TLC)

Utiliza el análisis espectral UV-vis para la identificación de compuestos. Sigue siendo uno de los métodos más populares debido a que permite el análisis de un gran número de muestras, bajo coste operativo y facilidad de identificación; sin embargo, requiere de una preparación previa, a través de varios métodos de extracción y purificación en función de las propiedades y el tipo de toxina, disminuyendo la velocidad de estudio.

Cromatografía de gas (GC)

Se basa en la detección de productos volátiles. Debido al hecho de que muchas micotoxinas no son volátiles y por lo tanto deben ser derivatizadas para el análisis GC, se emplea con menor regularidad.

Cromatografía líquida(LC)

Es un tipo de cromatográfia en columna, en la cual un disolvente (fase móvil) pasa a través de una fase estacionaria (columna) mediante la acción de una bomba. La separación de las moléculas ocurre en base a la interacción de éstas con la fase móvil y fase estacionaria. En general requiere de una preparación previa de la muestray de un analista con gran experiencia, y tanto el equipo como su mantenimiento tienen un coste muy elevado. Es una técnica selectiva, reproducible y exacta. La detección se realiza mediante técnicas de espectormetria de absorción y emisión, como por ejemplo la detección ultravioleta (UV) y la fluorescencia (FL), basadas en la presencia de un cromóforo en las moléculas, o bien mediante espectrometría de masas (MS), basada en la identificación de las moléculas según su relación masa/carga. Por su capacidad de análisis multi-micotoxina, sus bajos límites de cuantificación y por su fiabilidad inequívoca, el LC-MS es el método de elección por excelencia para el análisis de micotoxinas.

Como hemos visto, aunque hay una gran variedad de métodos diagnósticos para la detección de micotoxinas, el ELISA sigue siendo uno de los más populares debido a su coste relativamente bajo y a la facilidad de su aplicación y velocidad, estando disponibles en el mercado kits de ELISA para la detección de una gran variedad de micotoxinas. No obstante, pese a su simplicidad, capacidad y técnica de cuantificación de límites relativamente bajos, presenta una gran falta de información sobre la estructura del analito. Por ello, los resultados positivos por ELISA requieren de una confirmación posterior mediante método LC que asegure el resultado gracias a su selectividad, reproducibilidad, exactitud y alto grado de automatización.